中藥材黃曲霉毒素檢測技術概述

一、 中藥材質量安全現狀

中藥材是中醫防病治病的重要基礎。中藥材在田間生長、采收加工、儲藏運輸等各個環節都會因污染霉菌而發生霉變。這些霉菌分泌的有毒代謝產物使中藥材發霉變質，直接威脅到群眾的用藥安全。中藥中的霉菌毒素主要有AFT ，赭曲霉素，玉米赤霉烯酮，展青毒素，伏馬毒素等。中藥材的種類是影響真菌毒素污染的主要因素,易污染的中藥材,在不同的溫、濕度條件下均可產生真菌毒素。溫度和濕度條件也可以影響真菌毒素的增長,如：AFT 在不同的溫、濕度條件下均可以產生；赭曲霉毒素需要在濕度較高的條件下才能產生。

近年來,隨著中藥材在市場上的持續升溫,其安全性越來越引起人們的關注。真菌毒素殘留作為中藥材微量外源性有毒有害物質,一般不表現出急性毒性,但通常有較強的蓄積性,致癌、致畸、致突變作用明顯,嚴重影響中藥材的安全性。

二、 中藥材真菌毒素控制相關國家法規

近年來，各級食品藥品監管部門不斷加大中藥監管力度，努力保持中藥質量總體穩定。

國家食品藥品監督管理局關于規范中藥生產經營秩序嚴厲查處違法違規行為的通知（國食藥監安[2012]187號文件）中，要求加強對AFT 、重金屬及有害元素、農藥殘留量等安全性指標的檢測和控制，切實保證中藥材質量和安全，另要求企業具備與生產品種相適應的檢驗設備和能力，嚴把質量檢驗關。

《國家藥品安全“十二五”規劃》，規劃中明確指出“開展藥品快速檢驗技術研究，搭建檢驗技術共享平臺”、“加快推進藥品快速檢驗技術在基層的應用，配置快速檢驗設備”，“加強縣級機構快速檢驗能力建設”的要求。

三、 中藥材真菌毒素檢測項目及*

國家食品藥品監督管理局對柏子仁、蓮子、使君子、檳榔、麥芽、肉豆蔻、決明子、遠志、薏苡仁、大棗、地龍、蜈蚣、水蛭、全蝎等14味藥材及其飲片品種項下增加“AFT ”檢查項目，限度為“AFT B1不得過5 μg/kg；AFT G2、AFT G1、AFT B2總量不得過10 μg/kg”。

2010 版《藥典》附錄IX V AFT 測定采用液相色譜法，另外增補藥典描述該法檢測建立增加柱后光化學衍生法。

四、 中藥材AFT 檢測方案介紹

（一）   儀器分析法

特點

免疫親和柱-液相色譜法：符合2010版《藥典》附錄IX V中AFT 測定液相色譜法，另外增補藥典描述該法檢測建立增加柱后光化學衍生法。

1.   設備和耗材配置　　

2. 樣品前處理:普瑞邦為中藥材提供不同的處理方案(詳細方案請聯系普瑞邦，普瑞邦開發了針對多種中藥材基質提供優化的處理方案)

3. 免疫親和柱凈化:

富集--洗滌--洗脫--收集全部洗脫液供化學衍生檢測用。

4. 化學衍生

為什么使用光化學衍生器？ 由于黃曲霉具有較強的紫外吸收和產生熒光的特性，因此可以進行HPLC-紫外或熒光檢測，但是同時AFT 中的B1、G1 由于其在含水的流動相中容易產生熒光淬滅，因此在很多的實驗中都會采用衍生法測定AFT 。衍生的方法也很多：有柱前的，柱后的，在線的，由于在線的柱后光化學衍生有明顯的優勢，所以現在被增補為藥典的檢測方法，優勢主要在于無需任何化學試劑、對人員無傷害；無需人員直接操作、避免誤差; 無需擔心衍生液腐蝕檢測器。

5. 液相色譜分析

（二）酶聯免疫法

特點

Pribolab(普瑞邦)推出的PriboFast^RAFT 總量試劑盒具有較高的靈敏度和準確度，適用于大量樣本的定量分析。

1. 方法原理

采用直接競爭酶聯免疫法，在微孔板上預包被AFT 抗原，加入樣本（或AFT 標準品溶液）及辣根過氧化物酶標記的AFT 特異抗體。樣本或標準品溶液中的抗原與預包被在板孔上的抗原競爭結合酶標抗體。未結合的酶標抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色液，讀取吸光值。樣品吸光值與其所含AFT 總量成負相關，與標準曲線比較即可得出樣品中AFT 總量的含量。

2. 設備和試劑配置：

3. 樣本前處理：中藥材：粉碎、提取、離心，取上清液加入PriboSpin離心小柱進行凈化。

為什么要用PriboSpin離心小柱？中藥材的基質復雜，提取時樣本液顏色較深，而且不容易去除。有機試劑提取凈化方法繁瑣，試劑揮發對環境及人體造成危害，且凈化效果不穩定。用PriboSpin離心小柱，則只需提取液離心過柱，即可去除提取液中的雜質，方便快捷，凈化效果好，且回收率可以達到85%以上。

4. 檢測步驟

4.1 免疫反應30min；洗板5次；顯色反應30min；終止反應，酶標儀讀OD值。

5. 分析結果的表述

用酶標儀判讀結果。

（三）免疫金標快速檢測法

特點

Pribolab(普瑞邦)推出的PriboStrip^TMAFT 總量免疫金標快速檢測條特異性好，適用于檢測樣本量大；短時間出具檢測結果并控制經費的情況，可以快速定性，初篩。

1. 方法原理

AFT 總量快速檢測條應用了競爭抑制免疫層析的原理，樣本中的AFT 總量在酶標孔中與膠體金標記的特異性抗AFT 單克隆抗體結合，抑制了抗體和NC膜檢測線上AF－BSA偶聯物的結合。如果樣本中AFT 總含量大于0.5 ug/L，檢測線不顯顏色，結果為陽性；反之，檢測線顯紅色，結果為陰性。

2.   設備和試劑配置

3.   分析步驟：中藥材粉碎溶解后取上清液檢測。吸取樣品滴加到加樣孔中，8-15分鐘讀取結果。在C線顯色的情況下：T 線顯色比C線深或一樣深是陰性。T 線顯色比C線淺，或無顯色是陽性結果。

五、 溫馨TIPS：

1. 中藥中真菌生長繁殖的有利條件主要是適宜的溫度與水分。如能將中藥貯存于10℃以下，水分保持在10％以下，就能有效地防霉。

2. 從事真菌毒素科研及檢測的人員，必須注意防護，如穿戴隔離衣帽，在進行真菌分離培養工作時，應戴口罩，并盡量防止孢子飛揚。

3. 操作臺面如有漏濺，應立即用新配的5％次氯酸鈉消毒。以5％次氯酸鈉（NaOCl）處理時，AFT 于數秒鐘內即被破壞，故是常用的消毒劑。

4. 也有應用生物學方法解毒的報道，生物學方法成本低，收效大，可能是一種有前途的除毒措施。

鑒于霉菌毒素對人體的危害，提醒各位奮斗在抗毒一線的老師們一定要注意保護自身安全哦！

關于Pribolab®（普瑞邦）

Pribolab®（普瑞邦）是面向提供霉菌毒素檢測解決方案的主要服務商之一，憑借強大的研發團隊和專業的霉菌毒素檢測技術的研究，為農業生產、食品加工與糧食、飼料工業等行業提供專業的霉菌毒素檢測技術與產品服務，同時為社會提供食品、飼料及飲料等的霉菌毒素、食品成分等檢測分析。