蓮子中黃曲霉毒素B1，B2，.G1，G2檢測方案

《中國藥典》對部分中藥材中AFB1的*規(guī)定為5µg/kg,黃曲霉毒素總*為10µg/kg。

目前來講，黃曲霉毒素AFT的檢測方法有液相色譜法(HPLC)，酶聯(lián)免疫檢測法等。液相色譜法可以的檢測中藥材中黃曲霉毒素的微小含量。而使用黃曲霉毒素 ELISA試劑盒則能夠快速而準(zhǔn)確的分析樣品中黃曲霉毒素殘留。

泰樂祺科技作為國內(nèi)專業(yè)從事霉菌毒素檢測技術(shù)與產(chǎn)品服務(wù)的供應(yīng)商，泰樂祺檢測應(yīng)用實(shí)驗(yàn)室重點(diǎn)關(guān)注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等問題，針對上述情況,提出了以下解決方案。 

免疫親和柱＋KRC光化學(xué)柱后衍生法

1. 簡介

PriboFast黃曲霉毒素B+G免疫親和柱（編號(hào)IAC-010-3）可選擇性吸附樣品液中的毒素，從而對毒素樣品起到非常針對性的純化作用，然后用HPLC/FLD＋KRC柱后衍生系統(tǒng)可以有效的測定黃曲霉毒素 B1、B2、G1、G2、濃度，提高檢測的準(zhǔn)確性和靈敏度。

2. 免疫親和柱/KRC衍生法特點(diǎn)：

• 采用高特異性的抗體。

• 柱容量高、柱體積大，穩(wěn)定的純化效率； 

• 柱內(nèi)膠含量高，保證穩(wěn)定的回收率；

• 符合國內(nèi)外*

• 純化后直接用于ELISA 法，液相色譜法，熒光光度法等。

• 適用于各種復(fù)雜基質(zhì)樣品處理
• 衍生化操作方便，光化學(xué)衍生化無需使用衍生試劑（通常電化學(xué)柱后衍生均需要使用衍生試劑，分析成本高，操作麻煩，儀器故障率較高）。
• 回收率高，達(dá)到90％以上

3. 免疫親和柱法操作步驟簡介：

1）樣品處理

•準(zhǔn)確稱取25g粉狀樣品，溶于125ml甲醇/水（70/30）中；

.加入5.0g氯化鈉以均質(zhì)器高速攪拌，提取2分鐘；

.4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾；

.取15mL濾液并加入30mL水稀釋，用玻璃微纖維濾紙過濾；

.取稀釋后液體待測；

.將免疫親和柱連接于20.0mL玻璃注射器下。準(zhǔn)確移取15.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；

.將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調(diào)節(jié)壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；

.以10.0mL水淋洗柱子2次，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；

.準(zhǔn)確加入1.0mL色譜級(jí)甲醇洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。

•2）測定：HPLC直接進(jìn)樣，經(jīng)黃曲霉毒素色譜柱、KRC光化學(xué)柱后衍生化后熒光檢測器直接記錄并計(jì)算出黃曲霉毒素B1B2G1G2濃度；

Pribofast KRC 柱后衍生器和 HPLC參數(shù)（符合GB23212-2008）

PriboFast KRC－25 柱后光化學(xué)衍生器         紫外燈波長：254 nm
HPLC-色譜柱 ：黃曲霉毒素色譜柱   150 x 4.6 mm; C-18
流  動(dòng)  相  ：甲醇-水  45:55
流      量  ： 1.0 mL/min                          

柱      溫  ： 35 °C
進(jìn) 樣 體 積 ： 20μL
熒光檢測器  ： λ-激發(fā)波長：365nm           λ-發(fā)射波長：455 nm

液相色譜儀檢測配置；

液相色譜儀帶有熒光檢測器；
Pribofast KRC－25 柱后光化學(xué)衍生裝置，配有納米燈管254nm，25米FTFE線圈。
黃曲霉毒素色譜柱 C18 150 x 4.6 mm