白胡椒中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的檢測方案

白胡椒中黃曲霉毒素B1、B2、G1、G2的檢測方案

白胡椒的氣味芳香，具有一定的藥用價值,它的味道相對黑胡椒來說更為辛辣，因此散寒、健胃功能更強。具有祛腥、解油膩、助消化的作用；其芳香的氣味能令人們胃口大開，增進食欲，是一種深受大眾喜愛的調味品；并且有胡椒的菜肴不易變質，說明胡椒還有防腐抑菌的作用，而且它可以解魚蝦肉毒。由于白胡椒的藥用價值和調味作用，被制作成很多的香精、香料、香辛料（如十三香）等等，受到廣大消費者的喜愛 。

但是白胡椒大部分都生長于高溫和長期濕潤地區(qū)，這樣的生長環(huán)境也促使一些霉菌毒素（黃曲霉毒素AF）的形成，黃曲霉毒素(AF)只有在濕度、溫度適合及通風良好才會生成。極有可能感染霉菌并產生黃曲霉毒素，進而對消費者的身體健康造成危害。并且近日“據日本新聞網報道，日本厚生勞動省日前宣布，將會停止我國山東一家公司的白胡椒的流通。在上個月7日對該商品進行突擊檢查時，發(fā)現1公斤白胡椒含有高達11微克致癌物質黃曲霉毒素。"

《中國藥典》對部分中藥材中AFB1的定量規(guī)定為5µg/kg,黃曲霉毒素總定量為10µg/kg。

目前來講，黃曲霉毒素AFT的檢測方法有高效液相色譜法(HPLC)，酶聯免疫檢測法等。液相色譜法可以精確的檢測中藥材中黃曲霉毒素的微小含量。而使用黃曲霉毒素ELISA試劑盒則能夠快速而準確的分析樣品中黃曲霉毒素殘留。

泰樂祺科技作為國內專業(yè)從事霉菌毒素檢測技術與產品服務的供應商，泰樂祺檢測應用實驗室重點關注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等問題，針對上述情況,提出了以下解決方案。

免疫親和柱＋KRC光化學柱后衍生法

1. 簡介

PriboFast黃曲霉毒素B+G免疫親和柱（編號IAC-010-3）可選擇性吸附樣品液中的毒素，從而對毒素樣品起到非常針對性的純化作用，然后用HPLC/FLD＋KRC柱后衍生系統(tǒng)可以有效的測定黃曲霉毒素 B1、B2、G1、G2、濃度，提高檢測的準確性和靈敏度。

2. 免疫親和柱/KRC衍生法特點：

• 采用高特異性的抗體。

• 柱容量高、柱體積大，穩(wěn)定的純化效率；

• 柱內膠含量高，保證穩(wěn)定的回收率；

• 符合國內外定量標準

• 純化后直接用于ELISA 法，高效液相色譜法，熒光光度法等。

• 適用于各種復雜基質樣品處理
• 衍生化操作方便，光化學衍生化無需使用衍生試劑（通常電化學柱后衍生均需要使用衍生試劑，分析成本高，操作麻煩，儀器故障率較高）。
• 回收率高，達到90％以上

3. 免疫親和柱法操作步驟簡介：

1）樣品處理

•準確稱取25g粉狀樣品，溶于125ml甲醇/水（70/30）中；

.加入5.0g氯化鈉以均質器高速攪拌，提取2分鐘；

.4000r/min離心5min或用槽紋濾紙過濾；

.取15mL濾液并加入30mL水稀釋，用玻璃微纖維濾紙過濾；

.取稀釋后液體待測；

.將免疫親和柱連接于20.0mL玻璃注射器下。準確移取15.0mL樣品提取液注入玻璃注射器；

.將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調節(jié)壓力使溶液以約6mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；

.以10.0mL水淋洗柱子2次，棄去全部流出液，并使2mL~3mL空氣通過柱體；

.準確加入1.0mL色譜級甲醇洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測用。

•2）測定：HPLC直接進樣，經黃曲霉毒素專用色譜柱、KRC光化學柱后衍生化后熒光檢測器直接記錄并計算出黃曲霉毒素B1B2G1G2濃度；

Pribofast KRC 柱后衍生器和 HPLC參數（符合GB23212-2008）

PriboFast KRC－25 柱后光化學衍生器       紫外燈波長：254 nm
HPLC-色譜柱 ：黃曲霉毒素專用色譜柱   150 x 4.6 mm; C-18
流  動  相 ：甲醇-水  45:55
流      量  ： 1.0 mL/min                          

柱      溫  ： 35 °C
進 樣 體 積 ： 20μL
熒光檢測器 ： λ-激發(fā)波長：365nm           λ-發(fā)射波長：455 nm

液相色譜儀檢測配置；

高效液相色譜儀帶有熒光檢測器；
Pribofast KRC－25 柱后光化學衍生裝置，配有納米燈管254nm，25米FTFE線圈。
黃曲霉毒素專用色譜柱 C18 150 x 4.6 mm