強致癌物質黃曲霉毒素M1檢測方案

黃曲霉毒素主要存在于谷物、堅果、花生、棉籽粉、玉米、干辣椒粉等食品中以及一些與人類血液，動物飼料相關的產品中。霉菌的生長并不一定表明黃曲霉毒素的存在，因為黃曲霉毒素只有在濕度、溫度適合及通風良好才會生成。黃曲霉毒素B類具有藍色熒光，G類具有綠色熒光。除了蔬菜中常見的(B1,B2,G1,G2)，還有存在喂食了有毒飼料的奶牛的牛奶中的黃曲霉毒素M，其中毒性高的M的代謝物為4－羥基化的產物Bs.黃曲霉毒素M1是黃曲霉毒素B1的羥基化代謝產物，也是一種強致癌物質。其危害巨大，人類日常消費食品中如牛乳及其制品是易受到黃曲霉毒素M1污染的食品之一。黃曲霉毒素的危害性在于對人及動物肝臟組織有破壞作用，嚴重時，可導致肝癌甚至死亡。毒性是As₂O₃的100倍其實主要是指黃曲霉毒素比As₂O₃毒。

目前來講，Aflatoxin M1的檢測方法有液相色譜法(HPLC)，酶聯免疫檢測法等。液相色譜法可以的檢測奶制品中黃曲霉毒素的微小含量。而使用黃曲霉毒素M1 ELISA試劑盒則能夠快速而準確的分析樣品中黃曲霉毒素M1殘留。

作為國內專業從事霉菌毒素檢測技術與產品服務的主要供應商， 2010年泰樂祺科技投巨資成立了"檢測應用實驗室"，重點關注食品安全事件尤其是涉及霉菌毒素安全等檢測技術問題，以期望快速提出解決方案。近期應針對奶中出現的黃曲霉毒素M1超標問題，泰樂祺科技提供了兩種檢測方案，可以幫助企業輕松應對奶中黃曲霉毒素M1的*檢測。

液相色譜法：

根據國標《GB 5413.37—2010》食品安全國家標準乳和乳制品中黃曲霉毒素M1 的測定

　實驗用前處理：

實驗儀器和好耗材包括：

恒溫水浴鍋　溶劑過濾器(帶真空泵)1000ml  高速勻質器 黃曲霉毒素免疫M1親和柱玻璃纖維濾紙 玻璃注射器 無熒光特性玻璃試管 空氣壓力泵 超聲波清洗機  定量濾紙 量筒 樣品瓶 容量瓶 移液器或移液管

　　實驗用試劑：色譜乙腈色譜甲醇 氫氧化鈉 石油醚 超純水或去離子水等等

HPLC條件：

樣品取樣：真菌毒素分析的大誤差來源是樣品的收集和取樣過程，所以必需保證樣品收集和取樣具有代表性。

樣品前處理：分不同樣品

牛奶  水浴加熱至40度，離心用上清液過柱凈化；

乳粉和粉狀嬰幼兒配方食品：稱取適量奶粉樣品，用于蒸餾水中，混合均勻使其充分溶解，離心離心用上清液過柱凈化；

發酵乳(包括固體狀、半固體狀和帶果肉型)：稱取適量奶粉樣品，用于蒸餾水中，調節PH值至微堿性，高速均質器勻漿，水浴加熱后離心，取上清液混合均勻使其充分溶解，離心離心用上清液過柱凈化；

干酪：稱取適量切細或粉碎，過篩用加純水溶解，高速均質器勻漿，超聲提取后收集上清液，然后用石油醚進行兩次萃取，然后用適宜的有機溶液萃取，取若干上清液過柱凈化

奶粉樣品，用于蒸餾水溶解中，調節PH值至微堿性，水浴加熱后離心，取上清液混合均勻使其充分溶解，離心離心用上清液過柱凈化；

奶油：稱取適量加甲醇水溶解，震蕩后分頁漏斗取下層溶液，蒸干后溶于水用于過柱凈化。

免疫柱凈化步驟：*符合GB/T 18980-2003

┅┅取出免疫親和層析柱, 恢復至室溫，將上方塞子取出斜剪斷，再插回親和柱上。

┅┅將免疫親和柱連接于玻璃注射器下。準確移取清澈液注入玻璃注射器；

┅┅將空氣壓力泵與玻璃注射器連接，調節壓力使溶液以約2-3mL/min流速緩慢通過免疫親和柱，直至2~3mL空氣通過柱體；

┅┅更換玻璃注射器與親和柱連接，在注射器中加入10ml水，調節壓力使水以約6mL/min流速清洗親和柱。

┅┅準確加入4mL色譜級乙腈洗脫，流速為1 mL/min ~2mL/min，收集全部洗脫液于玻璃試管中，供檢測。

注：收集管中的洗脫液即為純化后的樣品，可直接用ELISA,熒光和液相等方法檢測。

HPLC 檢測需要儀器與耗材

酶聯免疫檢測法：符合國家標準

酶聯免疫檢測法采用競爭ELISA，在微孔板上預包被黃曲霉毒素B1抗原，加入樣本（或黃曲霉毒素M1標準品溶液）及辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素M1抗體。樣本或標準品溶液中的黃曲霉毒素M1與預包被在板孔上的黃曲霉毒素M1抗原競爭結合辣根過氧化物酶標記的黃曲霉毒素M1抗體。未結合的酶標抗體在洗滌時被除去。再加入TMB顯色液，讀取吸光值。樣本的吸光值與其所含殘留物黃曲霉毒素M1抗原的含量成負相關。對照標準曲線，即可得出相應殘留物黃曲霉毒素M1的含量。

樣品處理

牛奶 直接離心取上清液用于檢測

奶粉及其他固狀奶制品：需要溶解于去離子水中，離心取上清液用于檢測

試劑盒檢測時間：30分鐘＋30分鐘

交叉反應率：

ELISA 方法檢測需要：

　　分析人員要求：

化學分析儀器及其相關專業或有液相色譜儀操作經驗的人員。

注：作為面向提供霉菌毒素檢測技術解決方案的主要服務商之一，PriboLab憑借強大的研發團隊和霉菌毒素檢測技術的研究，為農業生產、食品加工與糧食、飼料工業等行業提供專業的真菌毒素檢測技術產品與技術服務。北京泰樂祺作為 PriboLab在中國的合作伙伴，積極為國內客戶提供的霉菌毒素檢測技術與產品服務，為國內客戶提供適宜的霉菌毒素檢測方案，幫助國內客戶建立的霉菌毒素項目檢測平臺。